ELISA实验失败的解决方案

1. 试剂盒因素

试剂应选择灵敏度高、特异性好、稳定性好、批间差小、操作方便的试剂。

不同厂家的试剂一定不能混用，包括底物和洗涤液。由于校准标准有差异，还有抗体、检测方法、试剂、交叉反应等因素都会导致对样本的检测结果不一致。如：有的厂家酶标板孔间CV值大于20%，标记酶的活性及显色液的稳定性比较差，使用劣质的试剂必然导致结果的假阳性或假阴性。

要注意试剂的批号和出厂日期，虽然试剂的有效期多为1年，最好选择刚出厂的试剂盒。

要注意试剂盒的保存条件，一定要按试剂盒规定的要求保存。

要注意实验的操作要符合试剂盒说明书的规定，实验前要详细阅读说明书

2．标本因素和操作因素

血清是常规的ELISA标本，血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源性物质和外源性物质两种：

· 内源性物质

· 有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。

· 外源性物质

· 外源性物质常常是由于用于ELISA测定的血标本的采集、贮存等不当所致。如标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存过久、标本凝集不全和采血管中添加物等影响。

   所以，当ELISA测定结果与预期或文献报导中不一致时，应该首先考虑试剂因素，这个是做好实验获得正确数据的前提保证，其次还有标本因素和操作因素等多方面进行分析，并应采取相应措施排除干扰作用，从而为实验提供正确可靠的检测结果。