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ELISA的基本原理

更新时间:2014-03-10   点击次数:2885次
  hbzhan内容导读:酶联免疫吸附测定(enzyme-linkedimmunosorbentassay简称ELISA)是在免疫酶技术(immunoenzymatictechniques)的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。
  

  ELISA过程包括抗原(抗体)吸附在固相载体上称为包被,加待测抗体(抗原),再加相应酶标记抗体(抗原),生成抗原(抗体)--待测抗体(抗原)--酶标记抗体的复合物,再与该酶的底物反应生成有色产物。
  
  值越大说明酶内所含杂质越少。高纯度HRP的RZ值在3.0左右,zui高可达3.4。用于ELISA检测的HRP的RZ值要求在3.0以上。
  
  ELISA的基本原理有三条:
  
  (1)抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫学活性;
  
  (2)抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性;
  
  (3)酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果。
  
  LISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。
  
  不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大,可概括四个方面:
  
  1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。
  
  2、研究抗酶抗体的合成。
  
  3、显现微量的免疫沉淀反应。
  
  4、定量检测体液中抗原或抗体成份。

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