HRP标记抗体使用的注意事项说一说

　　HRP标记抗体的确有一些不便和一些小窍门，但其决不是太神密的事儿。
 

　　你需要掌握你所必须的标记物的特点，挑选适合的带活性标记物(HRP酶，生物素或是荧光染料)，对活性的标记物要清晰其溶解度(脂溶性或是水溶)、储存规定、活性结构域化学变化特点这些。有一些荧光染料有比较严苛的规定，一定要防水，一旦碰到水活性键在数分钟内或几个小时内*降解，脂溶性的染剂一般用DMSO,DMF类溶剂融解，一定要保证其不水分含量。在储存上全部荧光染料都规定遮光，应用和反映全过程都需要尽可能遮光。活性染剂的活性键与抗体的反映官能团务必要清晰，那样才可以确保给其出示适合的反映标准。
 

　　再度，有关抗体。抗体的纯净度好些，非特异和溶解度还要好，尽可能不必有转性抗体和沉淀。其融解的水溶液自然环境是为碳酸盐(例如PBS自然环境)，处在一个适合平稳的PH自然环境，水溶液中不带有游离的可影响反映的官能团异构，例如，绝大多数的活性染剂是与抗体的伯羟基(-NH2)反映，因此水溶液中一定不可以带有带伯羟基的化合物，大家提纯抗体全过程必须很多应用这种实验试剂，在中后期通常沒有除去整洁。
 

　　第三，标记反映全过程，标记反映的标准如果合适于标记物化学变化的，而于此同时又不可以损害抗体的活性。针对标记缓冲溶液中一样不可以有游离官能团或是缓聚剂影响反映；标记溫度和时间还要有效操纵；标记物与抗体的占比要适合，并不是愈多愈好。全部标记反映全过程要遮光，所应用触碰的全部的器皿枪嘴一定要整洁。
 

　　标记反应完之后，残留的未标记的标记物、有机溶剂一定要去除干净(去除干净的标准同抗体溶液环境中游离干扰物去除方法)，同时，PH要调整到抗体适的环境。必要的时候加入30&左右甘油和保护性的蛋白，分装成小份-20℃保存。
 

　　注意事项
 

　　1.在具备高质量HRP的条件下，所要标记的抗体也要活性高,效价高,纯度高，亲和力好，这是保证标记物效价高，免疫活性好的首要条件。
 

　　2.所使用试剂的PH和浓度及用量必须严格掌握。所用试剂，好(或必需)新鲜配制。如在戊二醛标记法中所用戊二醛应为新鲜纯品，因戊二醛储存过久可形成缩和体(杂质)。否则，影响标记效果。
 

　　3.室温搅拌时须避光，室内温度一般在25℃为宜。标记物每次透析前，须认真检查，防止漏液。
 

　　4.浓的标记物相当稳定，常加入30～40%甘油于-10℃下保存。4℃可保存1～2年，但稀释成1∶10，只能保存数周。已配制的使用液应在12小时内用完。切忌反复冻融。