本试剂盒采用双抗体夹心法，双抗体夹心原理，是基于要测试的抗原具有二价以上的特性，能识别包被抗体，同时能识别检测抗体，具体过程如下：
（1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体，洗涤除去未结合的抗体及杂质，并用无关蛋白封闭空余结合位点。
（2）加受检标本使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。
（3）加生物素标记抗体，使固相免疫复合物上的抗原与生物素标记抗体结合。*洗涤未结合的生物素标记抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。
（4）加辣根过氧化物酶标记亲和素，使生物素标记抗体与辣根过氧化物酶标记的亲和素结合。*洗涤未结合的酶标记物。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。
（5）加入底物显色，即可计算标本浓度。
（6）注：一个抗体分子上可以标记上若干个生物素分子，一个生物素分子可以结合一个辣根过氧化物酶标记的亲和素，从而带来了大量的辣根过氧化物酶结合到抗体上，比传统的直接辣根过氧化物酶标记抗体具有更高的敏感性和放大效应。

【人1,3-BPG酶联免疫试剂盒检测原理】 
本实验采用双抗体夹心ELISA法。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为抗人1,3-BPG单克隆抗体。检测相抗体为多克隆抗体，经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。